ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ДЕТЕКЦИЯ ДНК РИККЕТСИЙ МЕТОДОМ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ.
УДК 579.881.1:579.25].083.3
Карташов М.Ю.1,2,3, Микрюкова Т.П.1,3, Терновой В.А.1,3, Москвитина Н.С.3, Локтев В.Б.1,2,3,4
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ДЕТЕКЦИЯ ДНК РИККЕТСИЙ МЕТОДОМ ПЦР В РЕАЛЬНОМ
ВРЕМЕНИ
1ФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», 630559, Кольцово, Россия;
2Новосибирский государственный университет, 630090, г. Новосибирск, Россия; 3Томский государственный
университет, 634050, г. Томск, Россия; 4Институт цитологии и генетики, 630090, г. Новосибирск, Россия
Статья посвящена разработке высокоэффективного метода выявления генетического материала риккетсий, основан-
ного на полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием оригинальных праймеров к наиболее консервативным участкам гена цитратсинтазы (gltA). Аналитическая чувствительность разработанного ПЦР-РВ-теста позволяет выявлять от 80 геном-эквивалентов в анализируемой пробе в течение 3 ч. Высокая специфичность тест-системы экспериментально подтверждена определением нуклеотидных последовательностей амплифицированных фрагментов гена gltA. Апробация ПЦР-РВ-теста проведена на коллекции из 310 клещей видов I. persulcatus, I.pavlovskyi, D. reticulatus. Показано, что разработанный вариант праймеров и зонда позволяет с высокой степенью чувствительности и специфичности выявлять ДНК различных видов риккетсий, распространенных на территории России (R. sibirica, R. raoultii, R. helvetica, R. tarasevichiae). Предлагаемый ПЦР-РВ-тест может быть также использован для выделения фрагмента гена gltA с целью определения нуклеотидной последовательности и последующего генотипирования риккетсий. Использование предложенного метода облегчит задачу мониторинга природных очагов риккетсиозов.
