АКТИВНОСТЬ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ШТАММОВ Bacillus thuringiensis var. israelensis ПРИ РАЗНЫХ МЕТОДАХ ХРАНЕНИЯ.

УДК 579.64:632.937.15 doi: 10.15389/agrobiology.2018.1.201rus

АКТИВНОСТЬ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ШТАММОВ
Bacillus thuringiensis var. israelensis ПРИ РАЗНЫХ МЕТОДАХ ХРАНЕНИЯ*
В.П. ЕРМОЛОВА, С.Д. ГРИШЕЧКИНА, А.А. НИЖНИКОВ

Микробиологический метод борьбы с вредными насекомыми служит альтернативой
применению химических пестицидов. Основу энтомоцидных биопрепаратов составляют микроор-
ганизмы, обладающие стабильно высокими показателями эффективности против вредителей.
Целью настоящего исследования было изучение культуры штаммов Bacillus thuringiensis var. israelensis
(BtH14) на жизнеспособность, продуктивность и ларвицидность при хранении различны-
ми методами. Штамм 266/2 хранился на мясопептонном агаре (МПА) и в трупах комаров Culex
pipiens molestus 1 год, в кристаллах NaCl 1,5 года; штамм 71 — на МПА 1 год без пересева, 2 года
с пересевом через 6 мес; штамм 87а — методом криоконсервации 10 лет; штаммы 87, 404, 19/43 —
в лиофильно высушенном состоянии 28 лет; штаммы 7-1/23, 71/82, 19/1 — в кристаллах NaCl
27 лет. Культуру штаммов BtH14 выращивали на скошенном МПА при температуре 28-30 С в
течение 5-7 сут до полного образования спор и кристаллического эндотоксина. При хранении
BtH14 методом лиофилизации биомассу споровой культуры в пробирке на скошенном МПА смы-
вали 5 мл 20 % раствора NaCl. По 0,5 мл полученной суспензии с титром 107-108 КОЕ/мл вно-
сили пастеровской пипеткой в стеклянные ампулы, закрывали стерильным тампоном, затем сте-
рильной пробкой и замораживали в холодной ванне при температуре 22 С в течение 1 ч, высу-
шивали при 45 С в течение 23 ч, запаивали под вакуумом над газовой горелкой и хранили в
холодильнике при 3-5 С. При хранении BtH14 в кристаллах NaCl в пробирку со споровой куль-
турой на скошенном МПА вносили 5 мл 0,9 % физиологического раствора, тщательно растирали
петлей до получения гомогенной взвеси, по 0,5 мл вносили в стерильные биологические пробир-
ки, закрывали ватно-марлевыми пробками и хранили при комнатной температуре. При хранении
методом криоконсервации споровую культуру BtH14 суспендировали в мясопептонном бульоне
(МПБ) с 10 % глицерина. Полученные суспензии (по 200 мкл) разливали в криопробирки и хра-
нили при 80 С. Титр BtH14 и ларвицидную активность для комаров Aedes aegypti определяли 1-
2 раза в год. Исследования показали, что культура штамма 266/2 через 1 год хранения в трупах
комаров C. pipiens molestus и на МПА диссоциировала с образованием колоний IV морфотипа S-
формы (соответственно 0,8 и 1,6 %), утратившего активность для комаров A. aegypti. Титр спор и
ларвицидность штамма 71 через 1 год хранения на МПА в пробирках с запарафинированными
пробками сохранялись на исходном уровне. При пересеве через каждые 6 мес эти показатели сни-
зились соответственно на 12 и 16 % через 1 год, на 25 и 27 % — через 2 года хранения. Криокон-
сервация штамма 87а обеспечила стабильность титра и ларвицидной активности через 10 лет. Ис-
ходный титр и ларвицидная активность были соответственно 2,74½109 КОЕ/мл и 0,178½103 %.
Через 6 и 10 лет они составляли 2,82½109 КОЕ/мл и 0,19½103 %; 2,72½109 КОЕ/мл и 0,18½103 %.
Через 27 лет хранения в кристаллах NaCl титры штаммов BtH14 7-1/23, 71/82, 19/1 и ЛК50 для
комаров A. aegypti варьировали в пределах 3,12½109-3,52½109 КОЕ/мл и 0,135½103-0,150½103 %
при исходных значениях соответственно 3,98½109-4,29½109 КОЕ/мл и 0,10½103-0,11½103 %.
Титры и ларвицидная активность штаммов 87, 404, 19/43, которые хранили методом лиофильно-
го высушивания, оставались в пределах 3,32½109-3,68½109 КОЕ/мл и 0,11½103-0,14½103 %
при исходных значениях 3,86½109-4,45½109 КОЕ/мл и 0,087½103-0,103½103 %. Таким обра-
зом, лучшие показатели для BtH14 получены при хранении в лиофильно высушенном состоянии,
в кристаллах NaCl и с использованием криоконсервации.