УДК 615.281.03:616-002.5].015.8.076.7
Смирнова Н.С., Шипина Л.К., Лапенкова М.Б., Владимирский М.А.
ПРИМЕНЕНИЕ ЛИТИЧЕСКОГО МИКОБАКТЕРИОФАГА D29 ДЛЯ УСКОРЕННОГО
ФЕНОТИПИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ
ТУБЕРКУЛЕЗА К ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫМ ПРЕПАРАТАМ
ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова», НИИ
фтизиопульмонологии, Минздрава РФ, 127994, Москва
В условиях широкого распространения лекарственно-устойчивых штаммов микобактерий туберкулеза (МБТ) необхо-
димость ускоренных, в том числе фенотипических, методов определения чувствительности микобактерий к антими-
кробным химиотерапевтическим препаратам в клинических образцах является актуальным вопросом. Представлены
результаты применения ускоренного фенотипического метода определения чувствительности к антимикробным хими-
отерапевтическим препаратам клинических штаммов МБТ на основе применения литического микобактериофага D29.
Принцип метода состоит в оценке размножения микобактериофага в клетках МБТ в зависимости от ингибирования
метаболизма растущих микобактерий в присутствии чувствительных к ним антибактериальных препаратов. Размно-
жение микобактериофага оценивается посредством количественного анализа ДНК фага в полимеразной цепной реак-
ции в реальном времени (ПЦР-РВ). В работе использованы 102 клинических штамма МБТ, полученные после первичного культивирования или рекультивирования в пробирках системы MGIT (Bactec). После получения положительных результатов роста МБТ образцы инкубировали в течение 48 ч в CO2-инкубаторе в присутствии критических концентраций 10 широко употребляемых при лечении туберкулеза лекарственных субстанций в жидкой питательной среде Миддлбрук 7H9, обогащенной компонентами OADC, в формате 24-луночного культурального планшета с объемом питательной среды 1 мл на лунку, после чего в лунки планшета вносили 2·• 103 плакобразующих единиц микобактериофага D29. Через 24 ч проводилось количественное определение ДНК фага с помощью ПЦР-РВ с использованием реагентов фаг D29, ООО«Синтол». Увеличение порогового уровня флюоресценции Ct более чем на 2 цикла в пробах с антибиотиком в сравнении с контролем свидетельствует о чувствительности исследуемого штамма МБТ к антибиотику. При сравнительном исследовании с посевом на питательную среду Левенштейна - Йенсена уровень совпадений полученных результатов составил 91%. При сравнительном исследовании с тест-системой Bactec ограниченного числа штаммов с определением чувствительности для 10 препаратов уровень совпадений результатов — 96%. Подтверждены данные об обратной зависимости величины ΔCt и минимальной ингибирующей концентрации препарата. Отмечена предполагаемая высокая эффективность возможного набора реагентов на основе приведенного метода по критерию цена/качество.
