Идентификация MRSA
Метициллин-резистентный золотистый стафилококк (MRSA) является хорошо известной причиной бактериемии, пневмонии, инфекций кожи и мягких тканей, остеомиелита, что приводит к значительной заболеваемости и смертности во всем мире.
Для идентификации MRSA разработано множество методов исследования (например, MALDI-TOF с тестированием на чувствительность, молекулярные методы, хромогенный агар), и клинические микробиологические лаборатории часто используют несколько из них. В некоторых случаях это приводит к расхождению результатов, что может быть сложным для принятия решений и отчетности.
Как возникает резистентность к метициллину?
Staphylococcus aureus (SA) имеет пептидогликановую клеточную стенку, содержащую чередующиеся молекулы N-ацетилглюкозамина (NAG) и N-ацетилмураминовой кислоты (NAM) с пептидными цепочками, усиленными сшивками. Сшивание происходит при помощи пенициллин-связывающих белков (PBPs), которые являются мишенями бета-лактамных антибиотиков, таких как пенициллины и цефалоспорины.
У метициллин-чувствительного S. aureus (MSSA) эти антибиотики связывают PBPs и предотвращают образование сшивок, тем самым нарушая синтез клеточной стенки. Однако резистентность к метициллину может возникнуть, если PBPs изменены. MRSA производит гомологи PBP, такие как PBP2a (кодируется геном mecA) или, реже, PBP2c (кодируется mecC), которые не позволяют бета-лактамным антибиотикам прочно связываться, поэтому сшивка происходит.
Какие тесты используются для идентификации MRSA?
Тестирование MRSA может быть генотипическим или фенотипическим, но большинство из этих методов не может быть проведено непосредственно на образцах пациентов. При молекулярном тестировании мы можем обнаружить mecA и/или mecC - гены, наиболее часто вызывающие резистентность к метициллину. Однако положительные результаты молекулярного анализа прямого источника образцов (например, положительный посев крови) не могут быть окончательно приписаны SA, если присутствуют и другие mecA-ассоциированные организмы, такие как метициллин-резистентный Staphylococcus epidermidis.
Если в культуре растет чистый изолят SA, для выявления наличия mecA можно использовать латекс-агглютинационные и другие экспресс-тесты. Тесты латексной агглютинации выявляют PBP2a с помощью антител, специфичных к этому альтернативному пенициллин-связывающему белку. Хромогенный агар - это современный биохимический тест, использующий специфические ферменты, вырабатываемые MRSA (например, фосфатазу), которые расщепляют хромогены в среде.
Диск-диффузия и бульонно-агаровое разведение - это стандартные фенотипические методы количественной оценки резистентности к противомикробным препаратам у SA, растущих в бактериальной культуре. Несмотря на название, метициллин больше не используется для тестирования или терапии MRSA. Согласно Институту клинических и лабораторных стандартов (CLSI), резистентные к оксациллину и цефокситину SA должны регистрироваться как MRSA и считаться резистентными ко всем бета-лактамным антибиотикам.
Почему результаты моих тестов не совпадают?
Хотя обнаружение гена mecA или его белкового продукта PBP2a является стандартом, микст-культуры MSSA и MRSA могут привести к расхождению результатов. Другим источником генотипического и фенотипического расхождения являются мутации mecA, когда ген все еще присутствует и обнаруживается, но функциональный PBP2a больше не производится. PBP2c имеет лишь ~70% гомологии с PBP2a и не обнаруживается в анализах латексной агглютинации, а MRSA, опосредованный mecC, может быть резистентным только к цефокситину, но не к оксациллину. Другие механизмы резистентности MRSA все еще изучаются, и не все они включены в панели молекулярных тестов.
