Новости

Staphylococcus aureus является основной причиной костно-суставных инфекций (КСИ) и вызывает трудно поддающиеся лечению инфекции, связанные с несколькими механизмами персистенции.     В частности, его способность сохраняться в фагоцитирующих костных клетках ослабляет иммунную систему хозяина и действие большинства антимикробных препаратов. Следовательно, способность антимикробных препаратов уничтожать внутриклеточный резервуар S. aureus может оказать значительное влияние на риск хронического течения КСИ и возникновение рецидивов.    Было показано, что S. aureus сохраняется внутри фагоцитов благодаря фаголизосомальной репликации и выходу в цитоплазму. Он также заметно влияет на аутофагию, часть врожденного иммунного ответа против бактериальных инфекций, соответствующую катаболическому процессу, ведущему к образованию аутофагосомы - комплекса, заключающего внутрицитоплазматические бактерии. В этом процессе участвуют SQSTM1/p62 (секвестосома 1), убиквитиновый рецептор, необходимый для селективной деградации, и LC3, мембранный белок, участвующий в удлинении и созревании фагосом. Для уничтожения внутриклеточных бактерий аутофагосома и лизосома сливаются, образуя аутолизосому - гибридную органеллу с кислой средой.    Интересно, что ухудшение внутриклеточной антимикробной активности связано с плохим проникновением некоторых молекул в клетки, их низким распределением в субклеточном местообитании S. aureus и внутриклеточным появлением вариантов малых колоний (SCVs), а также с инактивацией препаратов кислым pH внутриклеточных органелл. Поэтому в некоторых исследованиях рассматривалось подщелачивание лизосом для восстановления внутриклеточной антибиотической активности. Оказалось, что ощелачивание также предотвращает появление SCV.    Таким образом, лизосомотропные алкалинизирующие агенты могут способствовать воздействию на интраостеобластный резервуар S. aureus при КСИ. Настоящее исследование представляет собой первую оценку различных лизосомотропных алкалинизирующих агентов, используемых в качестве адъювантов к традиционным антистафилококковым препаратам в модели остеобластной инфекции in vitro.    Проведенные предварительные эксперименты позволили нам установить наилучшие условия для доказательства концепции ощелачивания в нашей модели. Во-первых, определение МИК при pH 5 и 7 подтвердило, что низкий лизосомальный pH может снижать активность многих антимикробных препаратов. Под влиянием кислого рН и будучи наиболее назначаемыми при КСИ антимикробными препаратами, даптомицин, котримоксазол, клиндамицин и левофлоксацин были выбраны для дальнейшей оценки в модели инфекции остеобластов.    Во-вторых, на основании его высокого ощелачивающего потенциала при низкой цитотоксичности при протестированной концентрации и времени экспозиции, гидроксихлорохин был выбран как лучший адъювант для тестирования в комбинации с антибиотиками. Действительно, после 24 часов инкубации в концентрации 20 мг/л гидроксихлорохин позволил повысить рН лизосом с 4,8 до 7,0. Аналогично, Maurin et al. сообщили о повышении лизосомального рН с 4,8 до 5,3, 5,7 и 6,8 в мышиной модели исследования макрофагов с использованием амантадина (1 мг/л), хлорохина (1 мг/л) и хлорида аммония (1 мг/мл) (13).    Что касается влияния ощелачивания лизосом, то добавление гидроксихлорохина к антимикробным препаратам позволило значительно усилить их бактерицидное действие без межштаммовой вариабельности. В литературе мало данных о потенцировании антибиотиков ощелачивающими агентами для внутриклеточного уничтожения S. aureus. Наши результаты дополняют предварительные результаты, показавшие, что хлорохин (1 мг/л), ассоциированный с амикацином, увеличивал снижение интрамакрофагиальной инокуляции S. aureus. Кроме того, используя эпителиальные клетки легких человека, Leimer и др. показали, что флуклоксациллин, ассоциированный с хлорохином, значительно снижает долю внутриклеточных SCVs. В совокупности эти данные поддерживают использование этой адъювантной терапии против интрацеллюлярных S. aureus.    С другой стороны, некоторые антимикробные препараты с повышенной активностью при кислом pH могут быть ослаблены щелочной терапией. В частности, наблюдалось 8-42-кратное увеличение МИК рифампина при рН 7 по сравнению с рН 5, что может представлять собой существенное ограничение использования подщелачивающих стратегий, учитывая решающую роль рифампина в исходе инфекций, ассоциированных с ортопедическими процедурами. Однако МИК рифампина, оцененные при нейтральном pH, остаются намного ниже внутрикостных концентраций, достигаемых при использовании стандартных терапевтических доз. Кроме того, в качестве альтернативы могут быть предложены другие рифамицины, особенно рифабутин, который теоретически может выиграть от ощелачивания и проявить более высокую антибиопленочную и интрацеллюлярную активность.    Наконец, мы показали, что потенцирование антимикробной активности, связанное с ощелачиванием лизосом, было не единственным механизмом воздействия гидроксихлорохина на интрацеллюлярный резервуар стафилококков. Действительно, несмотря на отсутствие собственной антибактериальной активности, гидроксихлорохин сам по себе был способен значительно снизить внутриклеточную инокуляцию S. aureus. Сообщается, что гидроксихлорохин взаимодействует с аутофагическими процессами, в основном в онкологии. Наблюдаемое увеличение LC3-II, начиная с самых низких концентраций гидроксихлорохина, свидетельствует в пользу индукции аутофагии. Кроме того, слабое накопление SQSTM1 свидетельствует в пользу одновременного ингибирования образования фаголизосом, как описано для других типов клеток.    Поскольку гидроксихлорохин улучшал эрадикацию внутриклеточных бактерий, начиная с 2,5 мг/л, но усиливал антимикробную активность только с 10 мг/л, мы предположили комбинированный эффект индукции аутофагии при низких концентрациях, а затем антимикробного потенцирования путем ощелачивания лизосом при более высоких концентрациях. Следует отметить, что если гидроксихлорохин сам по себе вызывал значительное снижение внутриклеточного инокулята при низких концентрациях, он не мог предотвратить цитотоксичность, вызванную инфекцией.    Этот парадоксальный результат может быть обусловлен отсутствием внутреннего влияния гидроксихлорохина на рост бактерий и выделение токсинов. Наконец, обычная позология гидроксихлорохина в качестве пожизненного лечения ревматоидного артрита и красной волчанки составляет 400-800 мг/день, обеспечивая концентрацию в крови от 1 до 2,5 мг/л. Использование более высоких суточных доз - даже более коротких по продолжительности - во время лечения КСИ для улучшения эрадикации внутриклеточных бактерий, вероятно, невозможно из-за проблем с переносимостью. Тем не менее, настоящие данные представляют собой доказательство концепции на клеточной модели, и другие лизосомотропные агенты, такие как Lys05, новый 4-аминохинолин с улучшенной способностью накапливаться в лизосомах, могут обладать более мощным ощелачивающим эффектом и быть альтернативой гидроксихлорохину.    В заключение следует отметить, что гидроксихлорохин в качестве адъюванта к антимикробным препаратам может улучшить эрадикацию внутрикостного резервуара S. aureus за счет восстановления внутриклеточной активности некоторых антимикробных препаратов и препятствования бактериальному нарушению аутофагии. Эта новая клиническая перспектива требует теперь in vivo подтверждения ее эффективности и токсичности.

Нарушение коммуникации между Всемирной организацией здравоохранения, национальными лидерами и общественностью привело к началу пандемии в феврале 2020 года, говорится в расследовании.    ВОЗ была слишком осторожна при информировании о рисках КОВИД-19 в начале прошлого года, говорится в первом крупном исследовании глобальных ответных мер на пандемию. Если бы она была смелее и если бы страны прислушались к ее рекомендациям, пандемию можно было бы остановить, считают авторы доклада.    В прошлом году во время ежегодной Всемирной ассамблеи здравоохранения страны потребовали, чтобы ВОЗ инициировала независимый обзор того, как развивался кризис COVID-19, чтобы извлечь уроки на будущее. Итоговый отчет, опубликованный 12 мая, был подготовлен группой из 13 экспертов в области глобального здравоохранения, частично назначенных ВОЗ, но независимых от нее.    В объемном исследовании февраль 2020 года назван месяцем, когда - в параллельной вселенной - разрушительные последствия пандемии можно было бы уменьшить, если бы страны быстро приняли меры по ограничению распространения вируса. Далее в докладе перечисляются конкретные действия, которые могли бы помочь предотвратить подобную участь в случае появления другого патогена с пандемическим потенциалом, и излагается план того, как вакцины могут как можно скорее попасть в страны с низким и средним уровнем дохода, чтобы положить конец нынешнему кризису. "Реальность такова, что мы все еще находимся в гуще событий, - объясняет член группы Джоанн Лю, специалист по чрезвычайным ситуациям в области здравоохранения из Университета Макгилла в Монреале, Канада.    Некоторые исследователи говорят, что предложения группы по совершенствованию ВОЗ слишком расплывчаты. Однако группа дает несколько амбициозных рекомендаций, включая создание совета мировых лидеров по борьбе с пандемиями, говорит Стивен Моррисон, директор по глобальной политике в области здравоохранения Центра стратегических и международных исследований в Вашингтоне. "Они пытаются ухватить момент, который, как все знают, пройдет очень быстро", - говорит он. Нерешительная ВОЗ   ВОЗ забила тревогу, объявив о "чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения, имеющей международное значение" (ЧСОЗМЗ) 30 января 2020 года. Ей следовало сделать это примерно на неделю раньше, заключила независимая комиссия в своем предварительном докладе. Но в своем окончательном резюме расследования комиссия уделяет больше внимания тому, что произошло между этим сигналом тревоги и тем моментом, когда ВОЗ объявила кризис пандемией 11 марта. В отличие от декабря 2019 года и января 2020 года, к февралю опасность глобального распространения коронавируса SARS-CoV-2 была хорошо известна, и его последствия могли быть сдержаны национальными стратегиями сдерживания. "Совершенно очевидно, что февраль 2020 года был потерянным месяцем", - говорится в отчете.    В феврале прошлого года несколько азиатских стран предприняли решительные шаги по борьбе с COVID-19, включая введение комплексного тестирования на SARS-CoV-2 и отслеживание людей с положительным результатом. "Но весь остальной мир сидел сложа руки", - говорит Лю. Она и ее коллеги проанализировали, как ВОЗ информировала о риске в феврале 2020 года, и решили, что слишком осторожное взвешивание агентством недостаточных доказательств может помочь объяснить, почему многие страны не приняли меры.    "Когда стало очевидно, что в тех странах, где носят маски, дела обстоят лучше, чем в тех, где их не носят, - говорит она, - ВОЗ могла бы сказать, что, хотя у нас нет всех данных, мы должны руководствоваться принципом предосторожности" и рекомендовать маски. Аналогичным образом, в докладе указывается, что правительства могли бы более серьезно отнестись к опасности SARS-CoV-2, если бы ВОЗ раньше назвала эпидемию пандемией, хотя этот термин не определен в протоколах агентства по управлению чрезвычайными ситуациями в области здравоохранения.    Сразу после публикации отчета генеральный директор ВОЗ Тедрос Адханом Гебрейесус заявил, что он рассмотрит критические замечания и предложения, содержащиеся в расследовании, а также в двух других отчетах, ожидаемых в ближайшие недели, и обсудит реформы со всеми странами, входящими в ВОЗ.    Эксперты в области глобального здравоохранения давно обеспокоены тем, что ВОЗ сталкивается с серьезными ограничениями при принятии мер. У нее нет юридических полномочий для обеспечения выполнения рекомендаций и требования информации. И ей трудно критиковать действия правительств, поскольку она хронически недофинансирована и зависит от пожертвований стран-членов и территорий. Поэтому группа рекомендует увеличить бюджет агентства и говорит, что каждая страна с эпидемией должна разрешить сотрудникам ВОЗ доступ к местам вспышек в кратчайшие сроки - это намек на недели переговоров, которые потребовались для первого визита ВОЗ в Ухань, Китай (где были зарегистрированы первые случаи COVID-19), в феврале 2020 года.    Дженнифер Нуццо, эпидемиолог из Университета Джона Хопкинса в Балтиморе, штат Мэриленд, говорит, что эти изменения были бы хороши, но они не полностью решают проблемы, упомянутые в докладе. Например, странам придется согласиться на реформирование правил, определяющих протоколы ВОЗ, чтобы она имела право объявлять пандемию. В настоящее время она может объявлять только ЧСОЗМЗ. Нуццо добавляет: "ВОЗ - это только то, чем мы позволяем ей быть". Предотвращение будущих пандемий   Среди наиболее значимых рекомендаций доклада - создание организации за рамками ВОЗ - Совета по глобальным угрозам здоровью, который будет отчитываться перед странами за сдерживание пандемий. В совет войдут президенты и премьер-министры нескольких стран с высоким, средним и низким уровнем дохода, и его роль будет заключаться в том, чтобы на основании рекомендаций научных агентств делать предупреждения правительствам, если они не подготовились к чрезвычайным ситуациям в области здравоохранения или не отреагировали на них. Он может стать особенно мощным, если будет принят вместе с предложенным договором о пандемиях, который в настоящее время продвигается европейскими странами и в котором правительства обязуются усилить свои ответные меры. "Неплохая идея", - говорит Моррисон, - "но я не знаю, осуществимо ли что-нибудь из этого в нашем глубоко разделенном, националистическом мире".    Для того чтобы такой совет существовал, необходимо, чтобы большое количество правительств разных стран пролоббировали его принятие в Организации Объединенных Наций. Однако Моррисон говорит, что страны, которые обычно скрывают информацию, вряд ли поддержат группу, призванную оказать на них давление с целью добиться прозрачности. Тем не менее, говорит Лю, группа ставит перед собой высокие цели, чтобы соответствовать требованиям предотвращения еще одного кризиса такого масштаба. "К 2025 году мир ожидает 22 триллиона долларов США убытков", - говорит она. "Эта пандемия парализовала планету на 18 месяцев - когда такое было в последний раз?".    Лю и ее коллеги представят рекомендации мировым лидерам на Глобальном саммите по здравоохранению в Риме на следующей неделе и на Всемирной ассамблее здравоохранения в Женеве, Швейцария, в конце мая. Они хотят найти страны, готовые развивать эти идеи, чтобы они могли стать политикой.